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G418简介

   是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中常被用作抗性筛选。它通过抑制转座子Tn601,Tn5的基因对原核和真核等细胞产生

毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的

序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有G41 8的选择性培养基中生长。G41 8的这一选择特

性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。氨基糖苷类抗生素作用机制

氨基糖苷类抗生素具有强大的杀细胞作用,主要作用于细胞的核糖体,抑制蛋白质的合成。作用过程为:

   1、氨基糖苷类分子吸附于细胞表面,造成细胞膜轻度损伤;

   2、少数氨基糖苷类分子进入细胞,与核糖体结合,影响正在进行的肽链延长过程,造成遗传密码错读,全盛异常蛋白质;

   3、异常蛋白质结合进细胞膜,导致细胞膜渗漏;

   4、大量氨基糖苷类分子进入细胞,形成更多的异常蛋白质,加重了细胞膜渗漏和药物摄入量;

   5、进入菌体的氨基糖苷类分子显著超过核糖体数时,使核糖体内进行的蛋白质合成起始阶段全部停止,此作用系不可逆的,

    因此导致细菌迅速死亡。

   由于氨基糖苷类抗生素作用的结果,细胞内钾离子、腺嘌吟、核苷酸等重要物质外漏,细胞呼吸抑制、DNA和RNA的合成

    也受到抑制。

G418质量指标

G418 :白色粉末,融点138~144℃,溶于水、甲醇。

CAS No.:108321-42-2

分子式 : C20H 40N4 O10·2H2 SO4

分子量 :692.71


结构式 :


比旋: +104°― +121°

水分: ≤10%

吸光值: ≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)

效价: >700 ug/mg

储运

室温下运输, 干粉在室温下储存,溶于水、甲醇,溶液于-20℃储存。

G418使用方法

由于各真核细胞系对G418敏感度不同,各新细胞系或株稳定转染时杀死非稳定转染细胞所需用量需要通过实验优化。

最适用量通过建立细胞死亡曲线获得。将细胞稀释至1000cell/ml,每孔100ul加入有培养基的24孔板,将每孔中的G418浓度稀释

至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900, 1000,1100ug/ml等12个级别, 培养10-14天,以最低细胞全部死亡浓度为基准,一般

400-800左右,筛选时比该浓度再高一个级别,维持时使用筛选浓度的一半即可。



G418选择浓度范围

 
细胞系或机体
G418浓度(ug/ml)
中国仓鼠卵巢细胞
700~800
Madin-Darby犬肾细胞
500
人上皮A431细胞
400
猿CV-1细胞
500
盘基网柄菌属
10~35
植  物
10
酵  母
125~500


 

 

 
   
     
 
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