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转染常用的报告基因

 报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。

把它的编码序 列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因,或与其它目的基因相融合,在调控序列控制下进行表达,

从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控,筛选得到转化体。

  作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:(1)已被克隆和全序列已测定;(2)表达产物

在受体细胞中不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;(3)其表达产物能进行定量测定。

在植物基因工程研究领域,已使用的报告基因主要有以下几种:

胭脂碱合成酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基因(ocs)

   nos、ocs这两个基因是致瘤土壤农杆菌(Agrobacterium tumfaciens)的Ti质粒特有的,对Ti质粒进行改造,

用相应的致瘤农杆菌转化植物体时,如果外源基因转入植物体中,则这两种报告基因在植物根茎叶中均能表达,

不受发育调控,检测时直接用转化体提取液进行纸电泳,染色后在紫外光下观察荧光即可。

新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)
 
  nptⅡ、cat及庆大霉素转移酶基因,均为抗生素筛选基因,相关的酶可以对底物进行修饰(磷酸化、乙酰化等),

从而使这些抗生素失去对植物生长的抑制作用,使得含有这些抗性基因的转化体能在含这些抗生素的筛选培养基上

正常生长,也可以用转化体提取液体,外用同位素标记,放射自显影筛选转化体。氯霉素乙酰转移酶基因测时可通

过放射自显影观察


荧光素酶基因(luciferase Gene)

 1985年从北美荧火虫和叩头虫cDNA文库中克隆出来的,该酶在有ATP、Mg2+、O2和荧光素存在下发出荧光,这样就

可用转基因植物整株或部分直接用X-光片或专门仪器进行检测。具有检测速度快、灵敏度比cat基因高30~1000倍、

费用低、不需使用放射性同位素等优点,得到了广泛的采用。


   β-D-葡萄糖苷酶基因

  该酶催化底物形成β-D-葡萄糖苷酸,它在植物体中几乎无背景,组织化学检测很稳定,可用分光光谱、荧光等

进行检测。

除此之外还有庆大霉素转移酶基因等在动物基因表达调控的研究中,已使用的报告基因主要有以下几种:

   绿色荧光蛋白(gfp)基因等。

  绿色荧光蛋白来源于海洋生物水母,其基因可在异源组织中表达并产生荧光,GFP Cdnad 开放阅读框架长度

约740bp,编码238个氨基酸残基,其肽链内部第65-67位丝氨酸-脱氢酪氨酸-甘氨酸通过自身环化和氧化形成一

个发色基因,在长紫外波长或蓝光照射下发出绿色荧光。转染后的细胞可在荧光显微镜或流式细胞仪(FACS)中直接

观察基因的表达。

   此外还有β-半乳糖苷酶基因、二氢叶酸还原酶基因、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)

 

 

 
 
   
 

 

 

基因转染

转染常用的报告基因

各种转染方法比较

转染试剂比较一览表
  

  

 
   
 
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